PDF《4卷第4期》

1 h后,弃去旧培 养基, 加入新 鲜的堵 养基 , 继续 培养.

1 .

7 电 镜观 察取pBHGl l和pCAEI A共 转染

7 d后的

2 9 3细胞 上清,2000r/mi t l 离心, 取上清制样.用

2 % p H

6 . 2的 磷钨酸 溶渣 以滴 染法 对样 品进行 负染 ,

2 2

0 0

0 0倍 电镜 观察 .

2 结 果与 讨论

2 .

1 重 组转 移载体 p C A E I A的构 建与鉴定 将pCMV E

1 A 中含 E

1 A 基 因编码 区的 E c o R l / B a mHl

1 .

3 k b片段切下插人pCA1

3 相应的多克隆位点,得到重组转移载体pCAE1 A. p C AE1 A经EcoRI / B a mHI 限制性酶切消化,释放出一条

1 .

3 k b的小 带,载体片段与pCA1

3 / Eo

0 RI 和pCA1

3 / B a mHI 单酶切所呈带形相等 , 证 明是 所需 田性重组体.酶切 鉴定结果 如图I所示;

转移载 体pCAE1 A 的梅建过程 如图3所 示.2,2.重组病毒 v S A d 4的构 建与病毒颗粒的包装 质粒 p B HG

1 1由于腺病毒 5型基因组 E

1 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病毒学第l4卷

2 3

2 0

1 图1重组 转移载 体pCAEIA的酶切鉴 定Fi g

1 l ~ s t l f i e t e d g n2 ~ . d ~ gi s t i o n 0f r e e o m b l n a m t r v ~ [ o r p CAE| A b a nd c :州i.3kb锄Hgmcm7自.圈2重组 病毒 v S A d 4的电镜观 察Fi g.

2 EI e c t ∞ n ml e r o ~ ........