PDF《受理号：CSZ1600116》

阳性参考品、精密度 参考品、干扰物质参考品采用大肠癌粪便样本;

检测限参考 品、线性范围参考品采用合成的 miR-92a 基因 RNA 片段稀 释配制而成,检测限参考品浓度为1*104 copies/μL 的miR-92a 基因RNA 片段,线性范围参考品浓度为1*107 copies/μL 的miR-92a 基因 RNA 片段. 各项企业参考品 综合用于产品检测灵敏度、特异性和重复性评价.试剂盒内 质控品包括质控品

1 和质控品 2,质控品

1 含有 miR-92a 基7/17 因RNA 片段,质控品

2 为0.1%DEPC 水,用于检测过程中 的质量控制.

(二)生产工艺及反应体系研究 1. 反转录 申请人对 PCR 反应体系中各主要原料 (反转录酶、 反转 录引物、RNA 酶抑制剂、dNTP、MgCl

2、PCR 反应缓冲液) 的浓度及用量,以及反转录程序进行优化试验,确定了最佳 的反转录试剂的生产工艺及反应体系. 2.荧光 PCR 扩增 申请人对 PCR 反应体系中各主要原料 (Taq 酶、MgCl

2、 dNTP、引物、探针、PCR 反应缓冲液、50% 甘油)的浓度 及用量以及 PCR 反应程序进行优化试验, 确定了最佳的荧光 PCR 扩增试剂的生产工艺及反应体系. 3.申请人也对 RNA 浓度、反转录模板量、PCR 模板量、 粪便样本量、样本采集方法进行了研究,进一步确定了试剂 盒反应体系的各项参数和指标.

(三)分析性能评估 该产品分析性能包括检测限、 阴性符合率、 阳性符合率、 精密度、干扰物质、线性范围等. 最低检测限评估中,申请人采用高浓度 miR-92a 阳性参 考品梯度稀释于提取的不含 miR-92a 基因的粪便样本中,分 别进行

25 次重复检测, 得到检出率为 95%的浓度水平为

100 8 /

17 copies/μL 作为本试剂的最低检测限. 阳性符合率评估中,申请人采用临床确诊为大肠癌早期 患者、大肠癌中期患者、大肠癌晚期患者粪便样本各

5 份来 进行检测,检测结果显示阳性符合率达到 100%. 在精密度研究中,申请人采用晚期和中期大肠癌患者粪 便样本,评价了本产品批内及批间精密度,结果显示三批试 剂的批内和批间检测 Ct 值CV%均不高于 5%. 阴性符合率评价中,申请人针对 miR-92a 基因与其他同 源基因和 miR-92a 阴性样本非特异反应进行评价,样本包括 食道癌患者粪便样本、胃癌患者粪便样本、息肉患者粪便样 本、腺瘤患者粪便样本、胃炎患者粪便样本、肠炎患者粪便 样本、阑尾炎患者粪便样本、结肠炎患者粪便样本、消化性 溃疡患者粪便样本、肝癌患者粪便样本、胰腺癌患者粪便样 本、胆管癌患者粪便样本、口腔癌患者粪便样本及大肠癌阴 性样本.经验证食道癌样本、胃癌样本、息肉样本、腺瘤样 本、胃炎样本、肠炎样本、阑尾炎样本、结肠炎样本、消化 性溃疡样本、肝癌样本、胰腺癌样本、胆管癌样本、口腔癌 样本与该产品未见交叉反应,与miR-92a 阴性样本未产生非 特异反应,与常见的 miR-135b 和miR-21 基因不产生交叉反 应, 与人体细胞组织中的 GAPDH 基因、 β-actin 基因以及 U6 基因等 DNA 不产生交叉反应. 干扰试验结果显示大肠癌粪便水状样本不能用于检测;

9 /

17 带血粪便样本中,样本中血红蛋白含量超过>

8.0mg/mL 后, 不能用于检测;

粪便样本中胆红素含量≤0.2mg/g 时,血清白 蛋白含量≤10mg/g 时,对检测结果不会产生影响;

粪便样本 中白细胞含量≤4*106 个/mL 对检测结果不会产生影响;